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人乳鐵蛋白(hLF)cDNA的克隆及生物信息學分析.pdf

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    編號:20190224120443328    類型:共享資源    大?。?span class="font-tahoma">3.14MB    格式:PDF    上傳時間:2024-01-04
      
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    乳鐵蛋白 基因克隆 DNA序列 氨基酸序列 理化性質
    資源描述:
    本文為了研究不同個體或組織的hLF的堿基及氨基酸序列是否存在差異和進一步探討該基因的異源表達特性,從正常人外周血液中分離中性粒白細胞(WBC),提取總RNA;以Oligo(dT)為引物合成第1條cDNA鏈,將LF基因分成1.5和0.8kb 2個cDNA片段進行擴增,分別獲得預期的cDNA片段,將其插入pMD18-T載體中,得到2種重組質粒,經鑒定后再將2個cDNA片段切下來,與巴氏畢赤酵母表達載體pPICZα-A相連,獲得含有完整LF基因的重組表達質粒pPICZα-hLF。對所克隆到的hLF cDNA序列進行測定,結果表明,其cDNA全長為2,136bp,編碼711個氨基酸殘基。DNA序列與登錄的來自人不同組織的hLF序列進行比對,結果表明,堿基同源性達99%,有21個堿基發生了變化,其中有7個堿基變異不導致氨基酸的改變;氨基酸同源性為96~97%。 利用Vector NTI、DNAMAN和DNA Tools等生物軟件對hLF進行生物信息學分析。分析結果表明:(1)hLF的二級結構以α螺旋和β-折疊為主,二者沿蛋白質的氨基酸順序交替排列,且α-螺旋大大多于β-折疊;(2)三級結構在二級結構的基礎上折疊成2個基本相等的葉,每個葉進一步形成2個結構域和1條裂隙;(3)選擇9個哺乳動物類不同物種的LF氨基酸序列進行同源性比對,分析表明,人與其他物種的同源性程度從高到低依次是家鼠、山羊、牛、豬、猩猩、美洲旱獺、兔、狗;(4)hLF分子量為78,414Da,等電點為8.05;(5)hLF的氨基酸組成中,中性疏水氨基酸使用頻率為39.1%,中性親水氨基酸頻率為35.7%,帶電堿性氨基酸頻率為14.1%,帶電酸性氨基酸頻率為11.1%;(6)hLF肽鏈的疏水區預測是:hLF的N端和C端都具有很高的疏水性,疏水區位于分子的內部。
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    本文標題:人乳鐵蛋白(hLF)cDNA的克隆及生物信息學分析.pdf
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