2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、促性腺激素釋放激素(GnRH)是下丘腦-垂體-性腺軸的關鍵信息分子,在脊椎動物生殖神經內分泌調控中特別是在刺激促性腺激素的合成和釋放方面具有至關重要的調節作用,是神經-免疫-內分泌三大調節系統之間互相聯系的信使之一,魚類GnRH及其受體結構和生物學功能逐漸成為神經內分泌和生殖生物學研究的熱點之一。牙鲆(Paralichthys olivaceus),屬硬骨魚綱,鰈形目,鲆科(Bothidae),是中國重要的海水養殖魚類,關于牙鲆GnRH

2、及其受體的分子生殖內分泌研究未見報道,了解牙鲆GnRH及其受體的類型、分布和作用,對闡明牙鲆神經-生殖-內分泌的相互調控具有有十分重要的意義。本論文的研究結果如下: (1)本文采用免疫組織化學技術檢測了GnRH和NPY在性成熟牙鲆組織內的分布。表明:GnRH陽性細胞分布于腦、垂體、胃、腸、卵巢等神經、消化和生殖器官;NPY在延腦、大腦、卵巢中檢測到了陽性反應細胞。 (2)采用RACE技術獲得牙鲆607 bp全長cGn

3、RH-II cDNA,編碼95個氨基酸的前體肽。該cGnRH-Ⅱ前體肽包含有23個氨基酸殘基的信號肽、cGnRH-Ⅱ成熟十肽(QHWSHGwYPG)、一個3肽(Gly-Lys-Arg)加工位點和49個氨基酸殘基的促性腺激素釋放激素相關肽(GAP)。前體氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆cGnRH-Ⅱ前體與條斑星鰈(barfin flounder)相似性最高為97.6%,其次是軍曹魚科、麗魚科和鯛科魚類;與哺乳動物、爬行動物和兩棲動物同源性較

4、低。RT-PCR檢測顯示,cGnRH-Ⅱ基因在牙鲆腎臟、腦、垂體、鰓和卵巢中表達;以腎臟中表達水平最高。 (3)克隆獲得了牙鲆395 bp全長sbGnRH cDNA,編碼98個氨基酸的sbGnRH前體。該sbGnRH前體肽包含有26個氨基酸殘基的信號肽、sGnRH成熟十肽(QHWSYGLSPG)、一個三肽(Gly-Lys-Arg)加工位點和59個氨基酸殘基組成的GAP。前體氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆sbGnRH與條斑星鰈的

5、同源性最高為86.7‰RT-PCR檢測顯示,sbGnRH基因在牙鲆腦、胃、脾臟、眼、垂體、肌肉、腸、卵巢中皆有表達。 (4)利用3'-RACE技術克隆得到了牙鲆391 bp sGnRH cDNA 3'-末端片段序 列,該片段預測能編碼61個氨基酸殘基的不完全sGnRH前體肽,包含有sGnRH十肽的后4個氨基酸殘基“WLPG”、一個3肽(Gly-Lys—Arg)加工位點信號和54個氨基酸殘基的GAP。sGnRH 3’-

6、末端cDNA含有205 bp的3’-UTR。 (5)利用RACE和nest-PCR.結合技術克隆獲得了牙鲆1671 bp GnRH-R全長cDNA序列,包含147 bp的5’-UTR、1248 bp ORF和276 bp的3’-LJTR,編碼415個氨基酸。結構域預測表明,牙鲆CmRH-R含有7個跨膜結構域,屬于G蛋白偶聯受體家族A視紫質樣(Rhodopsin-like)亞家族,具有典型的G蛋白偶聯受體特征:包含1個胞外N.末

7、端尾巴、3個胞外loop、3個胞內。loop、由ECLs和ICLs連接的7個跨膜α螺旋以及1個胞內C-末端尾巴。GnRH受體進行蛋白活性位點搜索發現,牙鲆GnRH受體具有多個糖基化位點、酪蛋白激酶II(CK II)、磷酸激酶C(PKC)和磷酸激酶A(PKA)磷酸化位點,這些位點對于GnRH-R.的活性和偶聯反應具有重要功能。RT-PCR檢測表明牙鲆GnRH-R mRNA在腦、睪丸、腎臟、眼睛和卵巢中均有較強的表達。 (6)本文

8、探討了GnRH類似物(GnRH-A.)對活體牙鲆垂體中GnRH-R、GtHα、GtHI-β、GtHII-β和GH中轉錄水平的影響,試驗結果表明,GnRH-A能夠誘導牙鲆GnRH-R.、GtHα、GtHI-β、GtHII-β和GH mRNA表達水平的升高,分別在處理后6h、12h、36h、12h和12h達到高峰。 (7)采用離體培養和活體實驗相結合的方法,研究了CmRH-A對牙鲆淋巴細胞分泌IL-2的影響。體外實驗結果表明,低濃

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