2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、阿霉素具有強烈的生物化學效應,是臨床上的一種重要抗腫瘤藥物。阿霉素可由Streptomyces peucetius ATCC27952天然微量合成;傳統的化學法大規模合成阿霉素因其成本高、污染環境等缺點而制約了該藥的生產。阿霉素高產菌株的篩選一直是該藥生物合成法的研究熱點。在這些研究中,基因工程則表現出良好前景,特別是近年來合成生物學的快速發展。本研究則指向阿霉素關鍵酶基因的異源表達,以期實現阿霉素代謝通路的異源化構建,進一步實現阿霉素

2、的異源菌株的從頭合成。具體內容包括:
  1、針對阿霉素生物途徑長、涉及關鍵酶基因繁多,以商業化的pET-28a載體為基礎,將該載體的T7啟動子前的XbaⅠ酶切位點失活,并在其后面加一個XbaⅠ酶切位點;在T7終止子后加一個SpeⅠ酶切位點。構建出多基因串聯共表達載體,并命名為pBD,方便后續多基因的共表達;
  2、利用基因組提取試劑盒提取了S.peucetius基因組,用PCR克隆技術克隆并構建阿霉素合成關鍵酶基因的T載

3、體,然后構建表達載體,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)菌株,實現異源表達??寺×税⒚顾靥烊缓铣赏緩街胸撠煶涉?、成環以及成環后糖基化及其修飾基因共16個,依次為dpsA、dpsB、dpsC、dpsD、dpsE、dpsF、dpsG、dnrG、dpsY、dnrC、dnrD、dnrE、dnrF、doxA、dnrK、dnrP,表達了成鏈過程中關鍵酶基因依次為dpsA、dpsB、dpsC、dpsD、dpsE、dpsF、dpsG、dnrG、dpsY,

4、其中dpsA、dpsC、dpsE、dpsF、dpsY、dnrG正常表達。
  3、考慮到外源基因過表達往往降低工程菌的生物量,而生物量的積累往往會促進產量的提高;而大腸桿菌與克雷伯氏菌(Klebsiella.AA405)遺傳背景非常相似,研究了Klebsiella.AA405自身生長基因的過表達對甘油代謝途徑中1,3-丙二醇、2,3-丁二醇產量的影響。結果發現,與攜帶空質粒重組菌相比,過表達編碼核糖ABC轉運酶的rbsC基因工程菌

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