2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、空腸彎曲菌檢測一、空腸彎曲菌的分類和特性:屬于彎曲菌屬。主要包括空腸彎曲菌(Campylobacterjejuni)、結腸(或大腸)彎曲菌(Campylobactercoli)、海鷗彎曲菌(Campylobacterlari)、烏普色拉彎曲菌(Campylobacterupsalensis)、胎兒彎曲菌(Campylobacterfetus)等11種。其中空腸彎曲菌(C.jejuni)對食品安全的威脅最為嚴重??漳c彎曲菌(Campylo

2、bacterjejuni)是從20世紀80年代起受到國內外廣泛重視的人畜共患病菌。致病性:人類:急性細菌性腸炎、格林巴利綜合征(GBS)、食物中毒。動物:雛雞腹瀉與肝炎;火雞的肝炎與藍冠病。犢牛的腹瀉;綿羊的腹瀉或流產??漳c彎曲菌的生物學特性革蘭氏染色陰性。呈弧形,S形或螺旋形;菌體兩端尖,有極鞭毛,能做快速直線或螺旋體狀運動;1.5~5μm0.2~0.5μm,無莢膜。微需氧環境:5%O2、10%CO2和85%N2。最適生長溫度:424

3、3℃,37℃可生長,30℃以下不生長??漳c彎曲桿菌的流行病學和臨床表現宿主:家禽、野生鳥類為最主要的傳染源。(Rosef等在1981年調查了129個野生鳥類,結果表明24.8%攜帶空腸彎曲菌)鳥類遷移會造成病原菌對湖水與河水的污染。細菌分布范圍該菌分布廣泛,已從多種動物中分離出;也發現于食物與飲水中,尤其是畜禽肉及臟器與鮮奶。食用動物中雞的帶菌率為首位,其次為豬。主要分布在活雞的消化系統中如腺胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、直腸、泄殖腔

4、等。該菌在人或動物的糞便中存活約4周;在被污染的水源中可存活約5周。感染途徑:傳播途徑主要是由于攝取了該菌污染的食物與飲水后,細菌在人腸道內大量生長繁殖,引起急性腸炎。被污染的禽肉與未經過巴氏消毒的牛奶是導致發病的主要原因.患者臨床表現:患者表現為發熱、腹瀉、嘔吐或肌肉痛。潛伏期平均35天,病程約710天,糞便的特征是有時帶血,鏡檢中有多形核白血球,重癥病例也有痢疾樣血、粘液糞便。根據美國疾病控制與預防中心(USACDC)多年的美國食源

5、性病原微生物引起發病人數的統計資料,空腸彎曲菌導致的病例數排名第二。禽肉、生牛奶中的空腸彎曲菌被美國列為重點監測食源性致病菌之一。32ndCCFH(1999年)提出5組優先評估的“病原食品”組合其中包括“禽肉空腸彎曲菌”??漳c彎曲菌在許多發達國家也是被報告最普遍的胃腸炎致病菌之一,如:美國、英國、丹麥、芬蘭、愛爾蘭、荷蘭、挪威、瑞典、瑞士等。二、空腸彎曲菌的檢驗技術空腸彎曲菌空腸彎曲菌:在微需氧條件下42℃生長而25℃不能生長,在選擇性

6、固體培養基上形成特征性菌落,按照本標準檢驗時具有相符合的運動特性、生長特性與生化特性的革蘭氏陰性菌。設備和材料微需氧培養裝置:能夠提供微需氧條件(5%O2、10%CO2和85%N2)如使用產氣劑的厭氧罐袋或其它可代用的裝置等。三氣培養箱(如Binder等)彎曲菌檢驗程序增菌液接種方法一:稀釋處理將24h和48h的增菌液原液分別劃線接種mCCDA平板.(備注:也可選用CFA顯色平板或SimPlate分離鑒定及定量培養基)優點:經濟、方便缺

7、點:可能會有雜菌干擾mCCDA平板上所挑取的可疑菌落通常帶有金屬光澤、扁平、濕潤、沿劃線生長。CFA顯色平板上所挑取的可疑菌落為紅色、突起、濕潤,菌落較小直徑約2~3mm,邊緣有一圈紅色的透明環,中間有一個圓形的不透明、顏色較深的紅色小點的菌落。將所挑取的3~5個可疑菌接種到不含抗生素的哥倫比亞血瓊脂平板,微需氧條件下420.5℃培養24h48h后,進行后續的空腸彎曲菌鑒定??漳c彎曲菌的鑒定快速鑒定1.形態與動力性檢測對挑取菌落進行革蘭

8、氏染色鏡檢,空腸彎曲菌為革蘭氏陰性,彎曲如小逗點狀,兩菌體的末端相接時,呈S形、海鷗展翅狀或螺旋狀。對挑取可疑菌落制作濕片,鏡檢可見本菌呈螺旋樣運動??焖勹b定2.氧化酶試驗使用鉑銥接種環或玻璃棒,挑取單個菌落的一部分,然后接種到用氧化酶試劑潤濕的濾紙上,如果在10秒內出現紫紅色、紫羅蘭或深藍色為陽性,彎曲菌則為陽性??焖勹b定3.過氧化氫酶檢測挑取一環菌落培養物,加到在干凈顯微鏡玻片上的一滴3%過氧化氫溶液中,如果在30秒內出現氣泡則判定

9、結果為陽性??焖勹b定4.馬尿酸鹽水解試驗挑取欲檢測的菌落培養物,加到盛有0.4mL1%的馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液,注意不要帶入培養基瓊脂?;旌暇鶆蚝笤?7℃水浴中溫育2h或36℃培養箱中溫育4h。輕輕地在馬尿酸鹽溶液的頂部加入0.2mL茚三酮溶液,不要振蕩,在37℃水浴或36℃培養箱中溫育10min后判讀結果。若出現黑紫色則為陽性;若出現淡紫色或沒有顏色變化則為陰性??焖勹b定5.吲哚乙酸脂水解試驗挑取欲檢測的菌落培養物,加到羥基吲哚醋

10、酸鹽紙片上面,再滴加一滴滅菌蒸餾水。如果吲哚乙酸脂水解,則在5~10min內出現深藍色;若沒有顏色變化則表示水解反應沒有發生。后續鑒定1.微需氧條件下25℃生長試驗2.有氧條件下420.5℃生長試驗3.先鋒霉素(頭孢霉素)的敏感性檢測(可選)ISO:奈啶酮酸的敏感性檢測(越來越多的C.jejuni與C.coli的非特異性菌株出現)后續鑒定微需氧條件下25℃生長試驗挑取欲檢測的菌落培養物,接種到哥倫比亞血瓊脂平板上,25℃微需氧條件下培養

11、484h,若為空腸彎曲菌則不出現生長。后續鑒定有氧條件下420.5℃生長試驗挑取欲檢測的菌落培養物,接種到哥倫比亞血瓊脂平板上,420.5℃有氧條件下培養484h,若為空腸彎曲菌則不出現生長。后續鑒定先鋒霉素(頭孢霉素)的敏感性檢測(可選)挑取菌落培養物,在布氏肉湯中制備成濃度為0.5McFarl的菌懸液,再用布氏肉湯制備1:10的稀釋液,在5%MuellerHinton血瓊脂平板上進行涂布,靜置5min后去除多余液體,將平板在36℃培

12、養箱中放置10min。將先鋒霉素(頭孢霉素)藥敏紙片放在瓊脂表面。培養皿蓋子在上面,36℃微需氧條件下將平板培養222h。如果細菌緊貼著紙片生長則為有抗性;如果紙片周圍出現不同程度的細菌抑制生長則為敏感主要彎曲菌的生化特性與鑒定表:空腸彎曲菌結腸彎曲菌海鷗彎曲菌烏普薩拉彎曲菌.形態、動力性:革蘭氏陰性,彎曲如小逗點狀,兩菌體的末端相接時呈S形或螺旋狀或海鷗展翅狀,并呈現螺旋樣運動氧化酶試驗:陽性過氧化氫酶試驗:+++—或微弱馬尿酸鹽水解

13、試驗:+———吲哚乙酸脂水解試驗:++—+先鋒霉素敏感性:RRRS微需氧條件25℃生長試驗:不生長有氧條件42生長試驗:不生長(注:+陽性;—陰性;S敏感;R有抗性)已試用過的彎曲菌生化鑒定與篩選檢測的商品化試劑C.1彎曲菌的生化鑒定系統C.1.1API為手工生化鑒定系統,用于彎曲菌的菌種鑒定,鑒定結果準確,所需時間1天。(需要一定的技術與經驗積累)C.1.2VITEK2為自動生化鑒定系統,可以鑒定出空腸彎曲菌空腸亞種、結腸彎曲菌、胎兒

14、彎曲菌胎兒亞種,且結果準確,操作簡便,所需時間6小時左右。微生物API鑒定系統C.2彎曲菌的篩選檢測方法C.2.1miniVidas用于彎曲菌的初篩,原理為酶聯熒光免疫分析(ELFA)方法。對于結果陰性的可以直接判定為陰性,對于結果陽性的需進一步確認,可比傳統方法快2天。(具體參照廠家說明)C.2.2BAX系統原理為利用PCR進行基因檢測,用于空腸彎曲菌和大腸彎曲菌的篩選,陽性結果仍需確認??漳c彎曲菌檢測流程樣本制備增菌檢測樣本選擇性增

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